Analogue d'acide aminé photo-réactif - Photo-reactive amino acid analog
Les analogues d'acides aminés photo-réactifs sont des analogues artificiels d'acides aminés naturels qui peuvent être utilisés pour la réticulation de complexes protéiques. Des analogues d'acides aminés photo-réactifs peuvent être incorporés dans des protéines et des peptides in vivo ou in vitro . Les analogues d'acides aminés photo-réactifs couramment utilisés sont les analogues photoréactifs de la diazirine à la leucine et à la méthionine , et la para- benzoylphénylalanine. Lors d'une exposition à la lumière ultraviolette , ils sont activés et se lient de manière covalente à des protéines en interaction qui se trouvent à quelques angströms de l'analogue d'acide aminé photo-réactif.
La L-Photo-Leucine et la L -Photo-Méthionine sont des analogues des acides aminés naturels L -Leucine et L- Méthionine qui sont incorporés de manière endogène dans la séquence primaire des protéines pendant la synthèse en utilisant la machinerie de traduction normale. Ils sont ensuite activés par la lumière ultraviolette (UV) pour réticuler de manière covalente des protéines dans des domaines d' interaction protéine-protéine dans leur environnement in vivo natif . Le procédé permet la détermination et la caractérisation des interactions protéiques à la fois stables et transitoires dans les cellules sans l'ajout d'agents de réticulation chimiques et de solvants associés qui peuvent nuire à la biologie cellulaire étudiée dans l'expérience.
Lorsqu'ils sont utilisés en combinaison avec des milieux limitants dépourvus de leucine et de méthionine, les dérivés photo-activables sont traités comme des acides aminés naturels par la machinerie de synthèse des protéines cellulaires . En conséquence, ils peuvent être substitués à la leucine ou à la méthionine dans la structure primaire des protéines. Les dérivés de photo-leucine et de photo-méthionine contiennent des anneaux de diazirine qui sont activés lorsqu'ils sont exposés à la lumière UV pour devenir des intermédiaires réactifs qui forment des liaisons covalentes avec les chaînes latérales et les squelettes des protéines à proximité. Les protéines qui interagissent naturellement dans la cellule peuvent être instantanément piégées par photoactivation des protéines contenant de la diazirine dans les cellules cultivées. Les complexes protéiques réticulés peuvent être détectés par une mobilité réduite sur SDS-PAGE suivie d'un transfert de Western , d'une chromatographie d'exclusion de taille , d'une sédimentation par gradient de densité de saccharose ou d' une spectrométrie de masse .
Les références
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